本期为您推荐南京农业大学食品科技学院陆兆新研究团队发表在《食品工业科技》上的一篇文章：ARTP诱变联合抗生素抗性选育纳豆激酶高产菌株。

文章摘要内容如下：

纳豆激酶来自于日本传统食品纳豆，主要通过纳豆枯草芽孢杆菌的发酵获得，是一种丝氨酸蛋白酶，属于枯草杆菌蛋白酶家族，菌株的产酶性能对酶的生产应用有着很大的影响。抗生素抗性筛选方法是从微生物对抗生素的耐药性中发展起来的菌种选育技术，同时抗生素抗性筛选方法作为一种选择性标记的筛选方法，可以淘汰掉大量非突变菌株，减小筛菌的盲目性。

本研究为获得产纳豆激酶（nattokinase，NK）活力增强的菌株，以纤维蛋白平板法测得酶活力值为判定指标，采用常压室温等离子体诱变系统（ARTP）对枯草芽孢杆菌XZI125进行诱变，通过酪蛋白平板法和利福平、卡那霉素、链霉素、氯霉素四种抗生素抗性筛选法获得高产NK突变菌株。经6轮摇瓶发酵验证，获得遗传稳定的高产突变菌株A27,Ar41和Ac35，摇瓶发酵5天的产酶活力分别比原始菌株（2490IU/mL）提高了23%，25.1%，26.5%。比较酪蛋白平板筛选方法和0.7μg/mL利福平、50μg/mL卡那霉素、60μg/mL链霉素、300μg/mL氯霉素四种抗性筛选方法，结果显示抗生素抗性筛选方法更有利于NK高产菌株的筛选。

近年来，ARTP技术在诱变育种中得到了广泛的应用，与其它传统诱变技术相比，ARTP诱变育种技术安全性高、突变率高、条件可控性强，可以大幅提高菌株的突变强度和突变库容量。本研究首次利用ARTP技术联合抗生素抗性选育纳豆激酶高产菌株，以期为纳豆激酶的工业化生产奠定基础。

文章精彩内容如下：

图2 枯草芽孢杆菌XZI125的ARTP诱变致死率及正突变率

表5 高产纳豆激酶突变菌株的产量

注：菌株编号“A”代表ARTP诱变后经酪蛋白平板筛选所得菌株；“Ar”、“Ak”、“As”和“Ac”分别为ARTP诱变结合利福平、卡那霉素、链霉素和氯霉素抗性筛选所得菌株。

图3 出发菌株、A27、Ar41和Ac35每代摇瓶发酵酶活力相对效价